使用ELISA試劑盒時必定要注意相關的事項

　　說明：ELISA操作嚴格要求定當做出好實驗。

　　按試劑盒說明書的要求準備實驗中需用的試劑。ELISA頂用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗刷的，應為新鮮的和高質量的。ELISA試劑盒自配的緩沖液使用pH計測量較正。從冰箱中取出的實驗用試劑應待溫度與室溫平衡后運用。試劑盒中本次實驗不需用的部分應及時放回冰箱保存。

　　為確保試驗的成功，使用ELISA試劑盒時必定要注意相關的事項。

　　1， 確認本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數目。

　　2， 將倍比稀釋的規范品各0.1ml順次參加一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標本按100ul每孔參加。

　　3， 酶標板加上蓋，37℃反響90分鐘。

　　4， 反響后用自動洗板機吸去酶標板內的液體；或甩去酶標板內液體，再對著吸水紙拍幾下。洗刷2次。

　　5，將準備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml順次參加。37℃反響60分鐘。

　　6， 0.01M TBS或0.01M PBS洗刷3次，每次浸泡1分鐘左右。

　　7，將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml順次參加。37℃反響30分鐘。

　　8， 0.01M TBS或0.01M PBS洗刷5次，ELISA試劑盒每次浸泡1-2分鐘左右。

　　9， 按每孔0.1ml順次參加TMB顯色工作液，37℃避光反響，反響過程中，要常常的調查，當肉眼可見規范品的前3-4孔有顯著的梯度藍色，后3-4孔不同不顯著時，即可參加TMB停止液0.1ml/孔。（顯色反響長不要超越30分鐘）。

　　10，用酶標儀在450nm測定O.D.值。

　　11，根據樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。用戶也能夠使用各種應用軟件來核算。應記住由于樣品稀釋了N倍，其實際濃度應該×N。